Indukcia zmien mRNA proteínov súvisiacich s tvorbou a udržiavaním ciev (kolagén) v srdci pomocou LNP spike
Jessica Rose, 15. januára 2025
Nový článok v časopise Nature poskytuje dôkazy o špecifických poškodeniach vyvolaných produktmi na báze modRNA-LNP
Do tlače sa dostal článok v časopise Nature s názvom: „Nanocarrier imaging at single-cell resolution across whole mouse bodies with deep learning“ (Zobrazovanie nano-nosičov s rozlíšením na úrovni jednej bunky v celom tele myši pomocou hlbokého učenia).1 Bol uverejnený 14. januára 2025 v časopise Nature Biotechnology. V pravej „Nature forme“ vysvetľuje, ako sa lipidové nanočastice biodistribuujú, a nielen to, ale aj to, že expresia „necieľového“ spike proteínu vyvoláva lokálne zmeny expresie proteínov, aktiváciu imunitného systému a poškodenie ciev.
V časti Diskusia nájdete možno jedno z najdôležitejších tvrdení v článku: Tento prístup zvyšuje presnosť cielenia a podporuje hodnotenie rizika toxicity odhalením aktivity mimo cieľa a jej dôsledkov. Je pozoruhodné, že SCP-Nano identifikoval off-targeting aj pri najnižších dávkach (obr. 4d), čo pomáha pri stratifikácii rizika a v prípade potreby poskytuje informácie pre výber alternatívnych formulácií vakcín alebo terapií.
Predtým, ako rozoberiem túto prácu, by som len rada pre záznam uviedla, že tu nie je nič ohromujúco nové. Každý, kto má vedecké vzdelanie (najmä v oblasti imunológie), to mohol predvídať (a aj predvídal) na základe toho, ako sa veci jednoducho majú a v skutočnosti sa už dávno majú na základe nášho súčasného chápania imunológie a ľudskej fyziológie. Je to tak, ako vždy hovorí Byram Bridle: nezmenili sme to, čo robíme v tomto boji proti tyranii – zostali sme v kurze ako imunológovia a virológovia a pokračovali sme v dobrej vede a výskume.
Čo sa zmenilo, je to, že veda bola zbastardizovaná a vyzbrojená a obrátila sa proti ľuďom. Veda sa NEZMENILA a integrita mnohých výskumníkov a lekárov sa nezmenila.
Hneď prvá veta abstraktu zhŕňa príbeh zločineckej nedbanlivosti, ktorá obklopuje zavádzanie injekčného produktu na báze génu COVIDu-19 modRNA-LNP, s ohľadom na lož, ktorú nám všetkým povedali v súvislosti s tým, že obsah ihly zostáva v mieste intramuskulárnej injekcie. Nikdy to tak nemalo byť a každému, kto sa na tom podieľal z hľadiska výskumu a vývoja, by stačilo prečítať si niečo o vývoji lieku Onpattro alebo si preštudovať niečo o metabolizme tukov, aby to vedel.
Účinnému a presnému vývoju nano-nosičov na cielené podávanie liečiv bráni nedostatok metód na analýzu ich biodistribúcie na úrovni buniek v celých organizmoch.
Táto veta znamená, že bolo ťažké vytvoriť tieto LNP produkty určené na dodávanie nukleových kyselín, pretože nemáme dobré spôsoby, ako merať, kam sa dostanú a aké budú fyziologické účinky, ak sa objavia napríklad v srdci.
Autori použili niečo, čo sa nazýva Single Cell Precision Nanocarrier Identification (SCP-Nano) na identifikáciu a kvantifikáciu nano-nosičov (vrátane našich neslávne známych LNP COVID) u myší. Pozreli sa na celé ich telá (v 3D!) a s rozlíšením na úrovni jednej bunky pomocou dômyselnej kombinácie benchworkingu a hlbokého učenia. Videli rôzne vzorce distribúcie v tkanivách po rôznych a rôznych spôsoboch injekčného podania (vrátane intramuskulárneho, intradermálneho, orálneho, intravenózneho a intranazálneho) s použitím veľmi nízkych dávok produktu (0,0005 mg kg-1) a čo nás možno viac zaujíma, videli, že intramuskulárne podané LNP nesúce mRNA hrotu SARS-CoV-2 sa dostali do srdcového tkaniva a viedli k zmenám proteómu, čo, ako píšu, naznačuje aktiváciu imunitného systému a poškodenie ciev pri „dávke vakcíny“.
Proteóm je celý súbor proteínov, ktoré sú alebo môžu byť exprimované genómom, bunkou, tkanivom alebo organizmom v určitom čase.2
Hlboké učenie je podmnožina strojového učenia, ktorá sa zameriava na využívanie neurónových sietí na vykonávanie úloh, ako je klasifikácia, regresia a učenie reprezentácie.
Obrázok 1, vyňatý z obr. 3: SCP-Nano odhaľuje rozdiely v biodistribúcii LNP na základe rôznych spôsobov aplikácie. https://doi.org/10.1038/s41587-024-02528-1
Uvedené zistenia ma znepokojujú, pretože „najlepšia“ technika distribúcie pľúcnou cestou zahŕňala intranazálnu expozíciu (druhý z piatich obrázkov) a mám dosť silný pocit, že by sa to mohlo využiť na to, aby sa nám produkty na báze génov (modRNA, RNA a DNA) vnucovali intranazálnou cestou (dýchaním), pretože by sa tak „vyhli problémom s biodistribúciou“. Čo sa nestalo. V návrhu DEFUSE sa spomína spojenie s PARC s cieľom vytvoriť prototyp aerosólovej cesty doručenia.
Obrázok 2: Drastic screenshot. Zdroj: https://drasticresearch.org/wp-content/uploads/2021/09/main-document-preempt-volume-1-no-ess-hr00118s0017-ecohealth-alliance.pdf
Ďalšia dôležitá poznámka v ich úvode zahŕňa zmienku o biomolekulárnej koróne, ktorá sa vytvorí pri zavedení LNP do biologickej entity, ako je myš alebo človek. To je tiež známe, pretože tieto tukové bubliny sú po vstreknutí veľmi analogické chylomikrónom. Je dôležité poznamenať, že autori pri svojich experimentoch použili rôzne formulácie LNP. Použili LNP použitý v Onpattro: takzvaný „klinicky schválený“ MC3-ionizovateľný lipid. Použili aj ionizovateľný lipid Moderna SM-102, keď skúmali, ako a či „recepty“ LNP ovplyvňujú off-targeting* na srdce a s tým súvisiace proteomické zmeny, ktoré pozorovali pri MC3. Okrem toho použili ionizovateľný lipid Pfizer ALC-0315, keď kontrolovali špecifické zacielenie na srdce medzi rôznymi receptúrami LNP.
Urobili to preto, lebo, samozrejme, chceme vedieť, či sa ich zistenia vzťahujú na „skutočnú vec“, však?
Off-targeting je pojem používaný v rôznych oblastiach, najmä v biológii, farmakológii, a technologických aplikáciách. Zvyčajne označuje nežiaduci alebo nepresný účinok nástroja alebo liečiva mimo jeho zamýšľaný cieľ. Tu sú konkrétne príklady jeho významu:
1. Biológia a génová editácia (napr. CRISPR-Cas9):
Pri použití nástroja CRISPR-Cas9 na úpravu génov môže dôjsť k úpravám na miestach v DNA, ktoré neboli zamýšľané (tzv. off-target effects). Tieto nepresnosti môžu mať nežiaduce dôsledky, ako napríklad poškodenie bunkových funkcií alebo vznik mutácií.
2. Farmakológia:
Off-targeting označuje situáciu, keď liek (napr. molekula navrhnutá na interakciu s konkrétnym receptorom) ovplyvní aj iné receptory alebo molekulárne dráhy, čo môže viesť k vedľajším účinkom. Napríklad liek navrhnutý na liečbu jedného ochorenia môže neúmyselne ovplyvniť iné systémy v tele.
3. Technológie a cielené systémy:
V technologických systémoch, ako sú cielené zbraňové systémy, drony alebo počítačové algoritmy, môže off-targeting znamenať zasahovanie nesprávnych cieľov alebo aplikovanie algoritmu na nesprávne údaje.
Dôsledky:
Off-targeting je problematický, pretože môže viesť k nežiaducej toxicite, nežiaducim vedľajším účinkom, alebo strate účinnosti technológie či liečiva. Preto je jeho minimalizácia dôležitým cieľom v oblasti vývoja liekov, génovej terapie alebo technologických aplikácií.
ChatGPT
Po vystavení prostrediu in vivo však nano-nosiče nevyhnutne získavajú proteínovú koronu**, ktorá môže ovplyvniť ich biodistribúciu a bunkové interakcie, čo komplikuje návrh nano-nosičov a predpovedanie cieľového tkaniva.
**Protein corona je vrstva proteínov a iných biomolekúl, ktoré sa spontánne viažu na povrch nanočastíc pri ich kontakte s biologickým prostredím, ako je krv, plazma alebo tkanivová tekutina. Táto vrstva hrá kľúčovú úlohu v interakciách nanočastíc s bunkami a organizmom, pretože ovplyvňuje ich biologickú identitu, správanie a osud v tele.
To znamená, že na základe toho, čo vieme o špecifických LNP a tvorbe biomolekulárnej korony, bolo úplne predvídateľné, že tieto veci sa budú pohybovať... kdekoľvek. Môžu byť tiež špecifické vložením špecifických proteínov, ako je APOE, aby sa náklad dopravil do pečene.
Pravdou je, že LNP dopravujú svoj obsah (aby zahŕňali RNA a DNA) kdekoľvek a kdekoľvek v tele. Vždy to vedeli. Museli to vedieť. Preto klamali. Nemýlili sa.
Vráťme sa k dokumentu. Technika SCP-Nano, ktorá je robustnou pipeline hlbokého učenia, je celkom úžasná, pretože sa dá použiť na mapovanie zavedených častíc na úrovni jednej bunky na vizualizáciu v 3D. Tento prístup zahŕňa použitie údajov zo zobrazovania celého tela a ich analýzu pomocou hlbokého učenia. Je to kombinácia ľudskej práce v laboratóriu a umelej inteligencie v simuláciách in silico, ktorá prináša veľmi „osvetľujúce“ výsledky.
Hlboké učenie je podmnožina strojového učenia, ktorá sa zameriava na využívanie neurónových sietí na vykonávanie úloh, ako je klasifikácia, regresia a učenie reprezentácie.
Na obrázku nižšie môžete vidieť vizualizáciu rozdelenia LNP podľa orgánov.
Obrázok 3, Vyňatý z obr. 2: SCP-Nano - pipeline založená na hlbokom učení na segmentáciu a analýzu všetkých cielených buniek. Zdroj: https://doi.org/10.1038/s41587-024-02528-1
Pre fajnšmekrov modelov hlbokého učenia uvádzame, že najvýkonnejší model, ktorý autori použili, bola „architektúra 3D U-Net so šiestimi kódovacími a piatimi dekódovacími vrstvami s aktivačnou funkciou ReLU (leaky rectified linear unit)“. Čo tu stojí za zopakovanie, je to, že tieto častice detekovali po zavedení dávky 0,0005 mg kg-1, čo zodpovedá dávke „vakcíny“. Svoje zistenia potvrdili aj histologickým vyšetrením pre patológov.
Ukazujeme užitočnosť SCP-Nano na štúdium dodávania mRNA na báze LNP, kvantifikáciu biodistribúcie pri dávkach už od 0,0005 mg kg-1 (ako sa bežne používajú vo vakcínach, čo je 100 až 1,000-krát menej ako dávky bežne používané v konvenčných zobrazovacích štúdiách nanočastíc), pričom odhaľujeme tropizmus tkanív závislý od aplikačnej trasy.
Miesta, kde zistili hromadenie LNP, označujú ako „off-target“ miesta, čo znamená, že ich našli na miestach, kde sa neočakávali alebo nemali dostať, ako sú pľúca, pečeň a slezina. Ďalším miestom, kde našli tieto akumulácie, bolo srdce. Čo teda toto hromadenie spôsobilo srdciam týchto myší? Pamätajte si, že títo ľudia urobili oveľa viac, než len vizualizovali, kam sa LNP dostali, pozreli sa na účinky exprimovanej mRNA a spike mRNA! na úrovni proteínov. Na nasledujúcom obrázku autori zvýrazňujú miesta akumulácie mRNA aj proteínu hrotov. Ako vidíte, oboje našli v pečeni, slezine a srdci, ako naznačujú zväčšené oblasti na obrázku celého tela myši.
Obrázok 4, výňatok z obr. 4: SCP-Nano odhaľuje expresiu proteínov z mRNA dodanej LNP a LNP mimo cieľa. Zdroj: https://doi.org/10.1038/s41587-024-02528-1
Ako autori správne poukazujú, je to znepokojujúce, pretože LNP s obalom cudzích nukleotidov na báze hrotov sme vstrekli miliardám ľudí a milióny ľudí zažili alebo zažívajú kardiálne nežiaduce udalosti. Je to veľmi dobre zdokumentované a preukázané, najmä pokiaľ ide o myokarditídu.
Vzhľadom na to, že LNP na báze MC3 sa používajú pri terapii RNA a vývoji liekov u myší, primátov a ľudí 23,38,39,40,41 a že existujú správy o srdcových komplikáciách po vakcinácii s použitím iného zloženia LNP, 42,43,44,45,46 ďalej sme skúmali možné účinky expresie mRNA v srdci riadenej LNP.
Na ďalšie skúmanie „otázky expresie mRNA riadenej LNP v srdci“ autori zvýšili injekčnú dávku, opätovne injikovali myši a kvantifikovali. V imunitných aj neimunitných bunkách v celom tele našli spike proteín odvodený od LNP-mRNA, a to znamená, že RNA hrotu sa prostredníctvom LNP dostáva do týchto základných buniek, tkanív a orgánov a že proteín hrotu sa vytvára na mieste. To sme tiež vedeli. Presnejšie povedané, hrot našli v endotelových bunkách a nie v kardiomyocytoch, imunitných bunkách alebo v tepnách v srdci.
Hmm.
Obrázok 5: Diapozitív z prezentácie pre D4CE 7. septembra 2023. Zdroj: https://rumble.com/v3gs4pw-damages-from-the-modified-mrna-containing-lnps-from-vessels-to-brain-a-numb.html?e9s=src_v1_upp
Štúdia pokračuje ďalej. Aby určili vplyv expresie mRNA lokalizovanej mimo cieľa, odobrali vzorky myší s expresiou mRNA a bez nej a zistili odlišné zmeny „súvisiace s bunkovým metabolizmom a signalizáciou a imunitným systémom v skupinách s expresiou mRNA“.
Pozreli sa aj na proteomické zmeny vyvolané samotnými LNP a tiež zistili odlišné zmeny, a presnejšie, našli „375 diferenciálne exprimovaných proteínov (DEP) (240 regulovaných nahor a 135 regulovaných nadol v LNP bez nákladu v porovnaní s PBS)“ a nie je prekvapujúce, že tieto faktory súvisia s metabolickými procesmi vrátane aktivity ribozómov, translácie a metabolizmu RNA. Tieto zmeny sme očakávali, keďže hovoríme o "únose” buniek s cieľom zneužiť ich na masovú produkciu cudzích proteínov.
Keď sa ďalej pozreli na vplyv expresie mRNA hrotov na proteomické zmeny, zistili, že „578 proteínov sa v mRNA hrotov LNP v porovnaní so vzorkami LNP bez nákladu regulovalo smerom nahor a 201 smerom nadol“. Ak budete čítať ďalej, začne to byť trochu desivé. Medzi tieto regulované proteíny patrí... hádate správne: kolagén.
Pozoruhodné je, že sme našli zmeny v proteínoch súvisiacich s tvorbou a udržiavaním ciev (jednotlivé diferenciálne exprimované markery: Cd34 a niekoľko členov rodiny kolagénu; skóre cievnej funkcie na obr. 4l a v doplnkovej tabuľke 2).
Napísala som niekoľko článkov týkajúcich sa kolagénu/fibrínu.
Obrázok 6: Zoznam niektorých mojich článkov na Substacku týkajúcich sa produkcie kolagénu v súvislosti so SARS-2 a injekciami proti C-19. Zdroj: https://jessicar.substack.com
Z toho vyplýva, že pri cielenom podávaní liekov prostredníctvom LNP by sa mala starostlivo posúdiť nielen hrotová mRNA, ale aj doručenie a expresia akejkoľvek mRNA.
Autori na základe týchto výsledkov naznačujú, že ide o platformu, ktorá NIE JE PLUG-N-PLAY. Súhlasím s autormi. Neboli si istí, či ich výsledky do určitého bodu boli výsledkom LNP so zvoleným ionizovateľným lipidom MC3, preto preverili aj LNP na báze ionizovateľného lipidu SM-103, ktorý používa spoločnosť Moderna. Zistili, že receptúra LNP spoločnosti Moderna vyvolala rovnaké zmeny v dysregulácii génov.
Podobne ako pri našich pozorovaniach s LNP na báze MC3 patrili medzi najviac dysregulované gény proteíny spojené s cievnou sústavou vrátane niekoľkých génov podieľajúcich sa na udržiavaní cievnej štruktúry, ktoré boli silne downregulované (jednotlivé proteíny na doplnkovom obr. 15d.
Dobre, že akcie spoločnosti Moderna klesajú.
Ďalej porovnávali a konfrontovali rôzne formulácie LNP vrátane tej, ktorú použila spoločnosť Pfizer s ionizovateľným ALC-0315, aby preskúmali toto pozorované „zacielenie na srdce“ pomocou LNP z hľadiska tvorby biomolekulárnej korony. Bolo to dôležité urobiť, pretože možno niektorý z prípravkov priťahuje špecifické biomolekuly, ktoré dopravia LNP napríklad k srdcu. Ale nie. Zistili, že biomolekuly, ako napríklad vitronektín, boli silne obohatené vo všetkých LNP korunách, takže medzi nimi nebol veľký rozdiel.
Pomocou proteomiky pomocou hmotnostnej spektrometrie sme pozorovali prítomnosť proteínov, ako je napríklad vitronektín, ktoré sa môžu naviazať na endotelové bunky, a tým uľahčiť zacielenie LNP na bunky srdca.
Na tomto mieste by som chcela zdôrazniť, že tento článok je predovšetkým o ich novej pipeline na vizualizáciu na úrovni jednej bunky, pričom ich zámerom nebolo nevyhnutne naznačiť potenciálne nebezpečenstvo injekcií proti COVIDu, ale demonštrovať širokú použiteľnosť SCP-Nano. V článku sa ďalej demonštrujú ďalšie aplikácie s ohľadom na vizualizáciu origami DNA a distribúciu adeno-asociovaného vírusu (AAV).
Ale hoci si myslím, že to, čo tu urobili, je neuveriteľné a že SCP-Nano sa stane prototypom, ktorý bude pravdepodobne prijatý pre budúce výskumné objavy, v skutočnosti ma zaujíma len to, čo zistili, čo sa týka „skutočného sveta“ a jeho ľudí práve teraz, pokiaľ ide o injekcie proti COVIDu.
Kričíme to z plných pľúc, že tieto injekcie spôsobujú poškodenie srdca. Vedeli sme, že LNP sa biodistribuujú z farmakokinetických štúdií, o ktoré požiadala FOIA, vedeli sme, že výroba proteínu hrotu na takzvaných „necieľových“ miestach, ako je srdce, sa nikdy neukáže ako dobrá vec pre človeka, ktorého srdce to bolo. Vedeli sme, že fibrotické lézie na srdciach ľudí, ktorým podali injekciu, boli priamym dôsledkom poškodenia vyvolaného tým, že proteín hrotu sa vyrobil na mieste, kam bol ho dopravil LNP. Vedeli sme tiež, že každá bunka, na ktorej sa na MHC nachádzajú hrotové peptidy, sa stane cieľom deštrukcie buniek vrátane endotelových buniek spojených so srdcom.
Skutočnosť, že títo autori preukázali proteomické zmeny vyvolané expresiou mRNA hrotov, ktoré zahŕňajú 578 upregulovaných a 201 downregulovaných proteínov, je ohromujúca, ale, žiaľ, tak trochu nie prekvapujúca. Zdá sa logické, že metabolické výdavky každej bunky vystavenej týmto COVIDovým LNP smerujú k chrleniu týchto cudzích proteínov a pravdepodobne je to na úkor produkcie iných proteínov. Je však zaujímavé, koľko z nich bolo aj downregulovaných. Mám toľko otázok.
Dodatok: K markerom kolagénu, ktoré boli rozdielne exprimované.
Obrázok 7: Cievne markery z doplnkovej tabuľky 2 a diferenciálne exprimované názvy kolagénu z doplnkových údajov 1. Zdroj: https://doi.org/10.1038/s41587-024-02528-1
Z markerov súvisiacich s kolagénom, ktoré boli diferenciálne exprimované, boli mnohé regulované nahor, ako je uvedené vo vyššie uvedenej tabuľke z doplnkových údajov 1. Od chrupaviek a zdravia očí až po angiogenézu, toľko možností využitia kolagénu. Kolagén typu XV je známy ako nádorový supresor. 3
Rodiny kolagénov: Fibrilárne (typ I, II, III, V, XI), Facit (typ IX, XII, XIV), krátke reťazce (typ VIII, X), bazálna membrána (typ IV), iné (typ VI, VII, XIII)
Prečítajte si tento článok a dozviete sa viac o tom, čo môže znamenať, že Col1a1 je Up.
Ochorenie súvisiace s IgG4 (IgG4RD) znamená FIBRÓZU a deštrukciu orgánov
To nakoniec vedie k smrti...
Tak prečo trvá tri roky, kým článok v časopise Nature posunie túto tému vpred? Posunie sa vôbec? Konečne?
Kliknutím na nasledujúci obrázok sa dostanete na prezentáciu, ktorú som predniesla pre Lekárov pre etiku COVID (skupina Michaela Palmera, nie tá druhá) o LNP a potenciálnych nebezpečenstvách.
Ak sa Vám tento preklad páčil a viete o niekom, koho by mohol zaujať, s kľudným svedomím ho prepošlite komukoľvek vo svojom zozname spriaznených duší…
https://rumble.com/v3gs4pw-damages-from-the-modified-mrna-containing-lnps-from-vessels-to-brain-a-numb.html?e9s=src_v1_upp
preklad: KisutumoMidonotaka –> https://tinyurl.com/yxxk3y9a
1 Luo, J., Molbay, M., Chen, Y. et al. Nanocarrier imaging at single-cell resolution across entire mouse bodies with deep learning. Nat Biotechnol (2025). https://doi.org/10.1038/s41587-024-02528-1
2 https://en.wikipedia.org/wiki/Proteome
3 https://en.wikipedia.org/wiki/Collagen,_type_XV,_alpha_1