Sledovanie kontaminácie DNA injekčných produktov proti COVIDu-19
Substack, Jessica Rose, 9. marca 2023
Na základe nových výsledkov je to horšie, ako sa pôvodne predpokladalo...
Môj priateľ Kevin McKernan odviedol neuveriteľné množstvo práce, vďaka ktorej sa podarilo odhaliť kontamináciu vo forme dsDNA v produktoch Pfizeru aj Moderny. Môžete si o tom prečítať tu a tu. (2x preklad) Po ďalšom a podrobnejšom pátraní sa však ukázalo, že je to horšie, ako sa pôvodne predpokladalo. Prečítajte si, prosím, najnovší článok Anandamidovom Substacku s názvom: "Bivalentné vakcíny Pfizer a Moderna obsahujú 20-35% expresného vektora a sú transformačne kompetentné v E.coli".
Správa na záver: Zvyšky expresných vektorov použitých na výrobu mRNA majú 100-násobne vyššiu úroveň kontaminácie, ako sa pôvodne navrhovalo, a znamenajú bilióny molekúl DNA na dávku. To má dôsledky na integráciu do nášho genómu.
Dôsledky pre integráciu do nášho genómu?
Počkajte teraz. Nesľúbili náhodou svätosväte, že to nie je možné, s dodatkom "si debil?" a/alebo "máš padáka"?
Počujem, že prišiel princíp predbežnej opatrnosti na svojom bielom koni? Nie. Sú to len vlaky Pfizer/Moderna/FDA/CDC/ETC, ktoré sa snažia prekabátiť pravdu.
http://www.gatewaynmra.org/get-started/
Kevinov tím pôvodne použil techniku nazývanú RNA-seq na preskúmanie, či v produktoch Pfizer a Moderna došlo ku kontaminácii, a zistil vysoké hladiny expresných plazmidov obsahujúcich kanamycín /neomycín /spike – "hladiny, ktoré v prípade produktov Pfizeru prekročili limity dsDNA stanovené EMA pre tieto injekčné produkty proti COVIDu-19". Je to znepokojujúce. Veľmi znepokojujúce. Ale počúvajte toto. V rámci procesu RNA-seq sa používa prísada nazývaná aktinomycín D (podobne ako Furious D), ktorá môže fungovať tak, že potláča amplifikáciu DNA tým, že potláča aktivitu DNA dependentnej RNA polymerázy (1). Hmm. Neznamená to teda, že DNA môže byť ešte viac, ako sa pôvodne predpokladalo?
Aby si to overili a aby obišli potenciálny problém aktivít aktinomycínu D spojených s RNA-seq, rozhodli sa použiť kvantitatívnu PCR (qPCR) a vizualizáciu gélu (elektroforézu), aby získali lepšiu predstavu o tom, s akým množstvom kontaminácie DNA majú do činenia. Úplne sa zbavili mRNA zo vzoriek Pfizeru a Moderny, prečistili existujúcu DNA a použili ju v následných testoch. To im umožnilo odpovedať na otázky týkajúce sa toho, či DNA kontaminujúca vzorky bola alebo nebola kruhová alebo lineárna: t.j. či bola alebo nebola schopná replikácie, a posúdiť pomer kruhových a lineárnych kontaminantov DNA.
Počiatočné sekvenovanie mRNA vakcín nebolo dostatočne dôkladné na to, aby sa zistila úplnosť linearizačnej reakcie.
To bola veľmi dôležitá otázka, ktorú bolo potrebné vyriešiť, pretože prvotná reakcia na ich pôvodné zistenia bola, že DNA bola lineárna(izovaná), a teda nebola replikačne kompetentná. Takže žiadny problém! Ale aj keď sa pozeráme na lineárne plazmidy (na rozdiel od kruhových) a aj keď tie prvé nemusia byť replikačne kompetentné (alebo menej ako ich kruhové kolegyne), predchádzajúci odhad Kevinovho tímu o miliardách potenciálne kontaminujúcich molekúl DNA je stále super znepokojujúci. Prečo? Pretože linearizačné reakcie pravdepodobne nie sú stopercentne účinné. Napríklad, ak sú reakcie účinné na 99%, stále by boli potenciálne prítomné milióny plazmidov schopných replikácie. Vidíte ten problém?
Takže geniálni labužníci získali nejaké vzorky Pfizeru a Moderny, zbavili sa modifikovanej mRNA, vybrali DNA (ktorá by tam v prvom rade nemala byť) a potom sa pokúsili transformovať baktérie E. coli pomocou tejto DNA. Hovorili sme o tom tu, ale tu je osviežujúce video:
Ide o to, že by nemali nájsť žiadne rastúce kolónie. Skutočnosť, že tieto plazmidy sú schopné replikácie (v akejkoľvek forme) – dokonca aj v laboratórnej E. coli – je v prvom rade znepokojujúca.
Potom vykonali qPCR testy s použitím špeciálne navrhnutých primerov na amplifikáciu špičky, kan alebo mRNA v plazmidoch, aby odhadli pomer plazmidu k mRNA.
Primery qPCR boli navrhnuté pomocou softvéru IDTs Primer Quest zameraného na gén kanamycínu v plazmide (HEX) a spike proteín v plazmide a mRNA (FAM).
Ide o vhodnejšiu techniku ako RNA-seq, keďže pri druhej menovanej technike dochádza počas čítania sekvencie k skresleniu smerom k RNA.
Purifikované produkty DNA a RNA zo vzoriek Pfizeru a Moderny tiež prebehli na géloch, aby sa odhadlo relatívne množstvo a veľkosť jednotlivých nukleových kyselín. Vždy je dobrým postupom skontrolovať, s čím pracujete.
A nakoniec vykonali celogenómové shotgun sekvenovanie DNA. Sekvenovanie sa nazýva shotgun, pretože – podobne ako keď sa vystrelí z brokovnice, nábojnica sa rozbije na množstvo menších kúskov – veľká genetická sekvencia sa v rámci tejto techniky sekvenovania rozbije na množstvo menších fragmentov (čítaní) a potom sa opäť zloží tak, aby zodpovedala referenčnej sekvencii (2). To umožnilo presnejšie zameranie na plazmid a oveľa vyššie pokrytie – zvýšenie z 500–4000 (čo stačí na určenie druhu alebo kmeňa organizmu, z ktorého DNA pochádza) až na 2-miliónnásobné pokrytie!
Účinné.
Takže prvá vec, ktorú by si mal každý uvedomiť, je, že pôvodný zdroj kontaminácie je pravdepodobne v etape in vitro transkripcie pri výrobe mRNA, pri ktorej môžu v mRNA spoločnosti Pfizer alebo Moderna zostať zvyšky plazmidovej DNA. Kevin to dobre vysvetľuje vo svojom Substacku. Tu je snímka z jeho článku, ktorá ilustruje, kde a ako môže DNA zostať vo výrobnom procese. Čo je tu naozaj alarmujúce, je to, že táto metóda môže viesť aj k syntéze skrátenej mRNA, o čom som rozsiahlo písala a nedávno aj prezentovala na konferencii.
Výrobu vakcín na báze mRNA najlepšie opisuje Nance a kol. Obrázok 3 Šablóna plazmidovej DNA. Reakcia T7 RNA polymerázy s m1¥-trifosfátom
Obrázok 3. Produkcia m1¥ mRNA transkripciou in vitro. Vľavo: Komponenty transkripcie in vitro reakcia. Vpravo: Inkorporácia m1¥-trifosfátu do RNA sa riadi schopnosťou m1¥ tvoriť kanonickú bázového páru s adenínom templátu DNA v aktívnom mieste RNA polymerázy T7.
Obrázok 2 – Reprodukcia obrázka 3 od Nance et al. upravená na identifikáciu plazmidu DNA v polymeráze RNA T7.
A ako upozorňuje Kevin:
Prítomnosť plazmidov na báze E.coli je kanárikom v bani pre kontamináciu lipopolysacharidom (LPS alebo endotoxínom). Vždy, keď vidíte vysokú úroveň kontaminácie plazmidmi pochádzajúcimi z gramnegatívnych baktérií, ako je E.coli, mali by ste očakávať vysokú úroveň kontaminácie endotoxínom. Injekcia endotoxínu môže viesť k anafylaxii a syndrómu toxického šoku.
"Tvojou citlivosťou otrasie aj tá najmenšia chyba. Hovoríš, že chceš stráviť zimu vo Firenze. Tak veľmi sa bojíš, že chytíš chrípku. Žiješ svoj život ako kanárik v uhoľnej bani. Aj keď ideš rovno, tak sa ti točí hlava." The Police
Mimochodom, kde som už počula o anafylaxii a TSS?
Myslím, že na tom, čo zistili pri tomto ďalšom vyšetrovaní, ma najviac znepokojuje dôkaz, že poly-A chvosty sa pridávajú po syntéze mRNA. Dôvod, prečo to považujem za desivé, je ten, že tieto poly-A chvosty by mohli byť pridané (teoreticky) k čomukoľvek, vrátane skrátených mRNA. Pamätáte si, ako sme o tom hovorili? To znamená, že tie kratšie proteíny, o ktorých sme hovorili a ktoré potenciálne boli dôvodom, prečo sme na Western Blote videli rozmazané menšie proteíny, sú pravdepodobne veľmi reálnou vecou. Netušíme, aké sú fyziologické účinky týchto skrátených proteínov.
Pokračujeme ďalej...
Nádherné kolónie našli v prípade transformácie DNA pochádzajúcej od spoločnosti Pfizer aj od spoločnosti Moderna. Ide o platne Kan (agar napustený antobiotikom kanamycínom), čo znamená, že plazmidy z produktov Pfizer aj Moderna poskytli E. coli rezistenciu voči kanamycínu. Preto tak rástli!
NEBExpress Kan citlivé bunky E.coli tepelne šokované 5ul DNA získanej zo 100ul vakcíny ošetrenej RNázou-A. Nanesené na LB agar s kanamycínom. P= Pfizer, M= Moderna
Obrázok 3. Transformácia NEBExpress Kan citlivých buniek E.coli. Platne sa kultivovali pri 37 °C počas 48 hodín. Na 1 platňu sa naneslo 200ul a 800ul SOC, aby sa zachytila celá transformácia.
V konečnom dôsledku to znamená, že "zodpovedné" plazmidy sú (pravdepodobne) kruhové a replikačne kompetentné.
Neznáma časť týchto dsDNA kontaminantov sú replikačne kompetentné plazmidy, ktoré môžu transformovať E. coli jednoduchým 20-sekundovým ošetrením tepelným šokom pri 42 °C. Tieto plazmidy poskytujú rezistenciu voči antibiotikám na LB-Kan platniach a môžu byť izolované z kultúr E.coli.
Zaujímavým bodom je tu otázka, či "zodpovedné" plazmidy budú alebo nebudú exprimovať hrot v nelaboratórnych E. coli. Odpoveď je pravdepodobne "nie", pretože mRNA v produktoch Pfizer a Moderna sú špeciálne navrhnuté tak, aby sa zamerali na ribozómy na transláciu u cicavcov. Plazmidy by sa museli integrovať do ľudského genómu, aby sa mRNA stala problémom z biologického hľadiska.
Kevin píše:
To môže umožniť expresiu mRNA z týchto plazmidov v bunkách cicavcov, ale pokiaľ plazmidy nie sú integrované do ľudského genómu, je nepravdepodobné, že by sa replikovali na vysoký počet kópií.
Veľmi rýchle a hrubé zhrnutie niekoľkých výsledkov:
RT-qPCR ukázala amplifikáciu DNA Pfizer spike a Pfizer kan/vektor takmer na rovnakej úrovni.
RT-qPCR bivalentnej vsuvky spike Pfizeru vs Pfizer vektor
Obrázok 9. RT-qPCR sekvencie Pfizer spike modrou farbou (FAM) a génu Pfizer Kanamycin v plazmide zelenou farbou (HEX). Takmer ekvivalentné skóre CT pre vektor a sekvenciu hrotu naznačuje množstvo kontaminujúceho vektora.
To znamená, že pravdepodobne existuje kontaminácia vektora. A práve kontaminácia DNA je pravdepodobne veľmi vysoká, pretože TK použité v týchto testoch boli dosť nízke – začínali pod 20. Pre kontext, pri všetkých tých BS PCR "testoch", ktoré každému vnucovali (a stále vnucujú), sa často používala hraničná hodnota 45.
https://jessicar.substack.com/api/v1/file/5ae80b40-9bed-4b34-bd20-3b412e32bd7e.pdf
Neváhajte a stiahnite si vyššie uvedený dokument na použitie v čestných vyhláseniach.
Obrázok 10. qPCR (bez reverznej transkripcie, takže len DNA) bivalentnej vakcíny Pfizer s multiplexným testom qPCR, ktorý je zameraný na gén kanamycínu vo vektore (červená) a spike proteín tiež vo vektore (modrá). Desaťnásobné sériové riedenia sa vykonávajú v troch opakovaniach pre každé riedenie. Tento test amplifikuje iba DNA vo vakcínach a to CT pod 20 preukazuje vysokú úroveň kontaminácie DNA.
Množstvo skutočnej kontaminácie na základe týchto výsledkov je pravdepodobne ohromujúce.
Kevin píše:
Kontaminácia DNA sa pohybuje v rozmedzí 8,19–11,3 ng/ul s 23–55 ng/ul mRNA. To zodpovedá 20–35% nukleovej kyseliny v každej vakcíne, ktorá je expresným vektorom. To je o niekoľko rádov viac ako limit 330 ng/mg stanovený agentúrou EMA.
Pri týchto úrovniach kontaminácie nie je aktivita RT z LINE-1 nevyhnutnou podmienkou pre integráciu genómu.
Pamätáte sa na všetky moje reči o LINE-1 ako reverznej transkriptáze potrebnej na reverznú transkripciu s následnou obavou z integrácie cudzej DNA do nášho genómu? Nuž, Kevin tu hovorí, že úroveň kontaminácie cudzej DNA je taká vysoká, že ani nemusíme uvažovať o probléme mRNA, ktorá je reverzne prepisovaná do DNA (pripravenej na integráciu).
Záverečné poznámky od skutočne usilovného vedca:
Tieto údaje nemôžu informovať o integrácii genómu a na riešenie zriedkavých prípadov mozaikovej integrácie u pacientov sú potrebné ďalšie práce na hĺbkovom sekvenovaní, ktoré preverila IRB. Bez ohľadu na tieto hypotetické obavy kontaminácia dsDNA presahuje špecifikácie EMA o niekoľko rádov a na hladiny endotoxínu a dsRNA v týchto vakcínach by sa malo uplatniť ďalšie skúmanie.
Reálne zdravotné problémy, ktoré majú milióny ľudí po tom, čo boli prinútení (vo väčšine prípadov) k injekčnému prijatiu tohto odpadu, sú početné a rozsiahle. Je viac ako pravdepodobné, že tieto nepriaznivé účinky sú priamym dôsledkom kontaminácie, na ktorú upozornil Kevin a jeho tím. A mimochodom, techniky, ktoré Kevin použil na dosiahnutie týchto záverov, sú veľmi bežné a navyše na ich použitie nie sú potrebné žiadne veľké náklady ani odborné znalosti.
Ponaučenie: Prečo sa tieto základné testy /postupy nevykonali /neuskutočnili pred tým, ako sa začali aplikovať injekcie miliardám ľudí? Alebo aspoň niekde na ceste? Prečo sa mojim kolegom vyhrážali za sekvenovanie svinstva v injekčných liekovkách Pfizeru a Moderny?
Myslím, že odpoveď je veľmi jasná: báli sa toho, čo sa zistí. Nielen čo sa týka samotných sekvencií (t.j.: furín-cleavage, HIV a miesta rezania), ale aj kontaminácie vznikajúcej pri výrobe mRNA používanej v každej injekcii.
Ospravedlňujem sa, ak sú v tomto diele preklepy alebo chýba plynulosť. Pri záverečnej korektúre ma úplne rozptýlili a strhli The Police. Zatočila sa mi hlava pri chôdzi v priamom smere…